木瓜蛋白酶的提取

本资料包含doc文件1个，下载需要5积分

木瓜蛋白酶的提取从青木瓜中提取木瓜蛋白酶，用考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度。通过本实验，掌握天然活性化合物的提韧蛋白质浓度的测定技术。
实验原理
木瓜天然酶
木瓜蛋白酶（papain），简称木瓜酶，又称为木瓜酵素。他是-种含硫基（-SH）肽链内切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，有较广泛的特异性，对动植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有较强的水解能力，同时，它还具有合成功能，能把蛋白质水解物合称为蛋白质。木瓜蛋白酶溶于水和甘油，水溶液无色或淡黄色，有时呈乳白色；几乎不溶于乙醇。氯仿和乙醚等有机溶剂。其最适pH为5.7（-般39.5皆可），在中性或偏酸性时亦有作用，等电点18.75；最适温度为5560℃（-般1085℃皆可），耐热性强，在90℃时也不会完全失活；受氧化剂抑制，受还原性物质激活。
木瓜蛋白酶广泛存在于番木瓜（Carica papaya）茎叶和果实中，以未成熟果实的乳汁中为最高。提取未成熟的番木瓜果实中的乳汁，采用现代生物工程技术提炼可得纯天然生物酶制品。
考马斯亮蓝结合法（Bradford法）测定蛋白质浓度的原理
在-定范围内，考马斯亮蓝G250蛋白复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量关系呈线性关系，故可以用蛋白质浓度的测定。
实验材料
1.材料
青木瓜
2.试剂
氢氧化钠、磷酸、考马斯亮蓝G250、牛血清蛋白、95%乙醇
3.主要仪器设备
离心机、磁力搅拌器、刀片、电子天平、紫外可见分光光度计、冰箱、pH计。
实验步骤
木瓜蛋白酶的提取
用薄不锈钢刀片沿未成熟的番木瓜过时的纵线将果皮割破，深度为23nm，根据果实大小的不同，每个果实可以切510条刀口。
将木瓜放于-个大烧杯中，适度挤压木瓜，使木瓜乳汁流入大烧杯中。
将手机的乳液按1:1量加入蒸馏水，搅拌1h，用NaOH将pH调至9.0。
将乳液用离心机在3500r/min的条件下，离心15min。
收集上清液至另-洁净的烧杯中，得木瓜蛋白酶粗酶液，测量其体积，冰箱中保