安米诺西斯A200氨基酸分析仪的使用经验及故障分析

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中图分类号：TH17 文献标识码 ：B doi：10.3969/j.issn.1672-4305.2013.04.057Experience in the use and failure analysis of aminoacid analyzer for aminosys A200GAO Hong-xiu，JIN Ping，ZHOU Yu-yan(Colege of Agriculture，Northeast Agricultural University，Harbin 1 50030，China)Abstract：The research on amino acids and the important means of quality restriction in the agricuhur-al products，food，medicines，etc with amino acid analyzer.In this paper，the experience of manage-ment and practice to use for German aminosys A200 are expounded，in order to give a reference for theuser and maintainer，the frequent troubles and maintenance are introduced on the basis of the authorsexperiences。

Key words：amino acid analyzer；maintain；fault analysis氨基酸是蛋白质的基本结构单位和生物代谢过程中的重要物质，氨基酸分析技术对蛋白质化学、生物化学和整个生命科学研究以及产品开发、质量控制和生产管理等具有重要意义 J，氨基酸自动分析仪是专门用来分析氨基酸的高效液相色谱仪，其优点是高压、快速、灵敏度高，试剂和样品用量少、重现性好、分析结果稳定 J。对于仪器不仅仅会使用，日常的维护和保养也是非常重要的。只有正确的操作加 日常的保养相结合方可大大提高仪器的使用寿命，降低分析成本，提高工作效率。本实验室2006年购置了-台德国安米诺西斯 A200全 自动氨基酸分析仪，下面就仪器使用与管理方面的-些体会总结如下，与同行共勉。

1 化学原理A200氨基酸分析仪的化学原理是基于阳离子柱色谱分离和柱后茚三酮衍生、光度法检测 J。这- 经典的方法原理是由Stein和 Moore于 50年代提出。两位化学家因此而荣获诺贝尔奖。迄今国际AOAC、欧盟和中国都采用这-公认的可靠的原理编制氨基酸的标准分析方法。如同所有色谱分析方法-样，氨基酸色谱分析定性的依据是该峰的保留时间。其定量依据是该峰的面积或峰高。A200依据可靠的分析原理和借助先进的硬件和软件技术来实现氨基酸分析的自动测定。

2 样品处理实验结果的好坏主要影响因素之-就是样品处理，-定要严格把好样品处理这-关。样品处理不好不仅会影响到样品测定结果，更容易污染仪器的分离柱。严格按照程序处理样品，特别对生理体液样品，更需小心谨慎，加沉淀剂-定要过量，离心所用时间宁长勿短，最后，-定要用 0.2 Ixm超滤膜进行超滤后方可上机，以防树脂的污染和柱头的堵高红秀，等：安米诺西斯 A200氨基酸分析仪的使用经验及故障分析 187塞 j。对于蛋白质水解氨基酸的样品前处理，可参照国家标准进行(详见中华人民共和国国家标准：饲料中氨基酸的测定 GB/T18246-2000)。对于像血清、尿液之类的生理体液样品，磺基水杨酸沉淀法可作为常用的除去蛋白质的方法。处理后的样品应该采用规定的样品稀释缓冲液按至少 1：1的比例进行稀释，以避免由于样品 pH值的较大差异而影响色谱分离和导致保留时间的反常。

3 仪器的使用在氨基酸分析仪管理工作中，必须严格按照仪器操作规程进行，决不简化操作步骤。首先检查缓冲液和茚三酮溶液是否足量及配置Et期，若茚三酮溶液配置日期大于4周，则另换新液。本文对茚三酮溶液放置时间进行了试验，如图 1～3图所示，大于4周后标准液的峰值明显减小，这时应立即更换茚三酮溶液，否则将会影响测定结果。本实验室将每次做完实验剩余的茚三酮溶液放于-80 oC超低温冰柜中，这样既避免了资源浪费又不会影响实验结果。其次是排气，为了防止管路中有气泡对结果造成影响，在每次工作之前都应进行排气。最后是检验进样器的坐标，每隔- 个月应对进样器的坐标进行校正，以免注射针折弯，不能正常摄液。在每次开机时和关机前都应进行清洗程序，以免污染柱子。只有严格按照操作规程进行，并认真地维护维修才能使仪器处于良好的工作状态，延长仪器的使用寿命。

图 1 刚配制的茚三酮缓冲液所做的标准样品图谱4 故障及其排除在仪器的使用中最常见的故障是超高压和超低压错误，如果仪器运转过程中出现超高压，分为三种情况：-是缓冲液流路超高压，则最大的可能性产生在分离柱入口处堵塞；二是茚三酮流路出现超高压，则最大的可能性出现在缓冲液茚三酮路的出口处堵图 2 配制半个月后的茚三酮缓冲液所做的标准样品图谱图 3 配制-个月后的茚三酮缓冲液所做的标准样品图谱塞；三是两边流路同时超高压，则最大的可能性出现在反应器堵塞。在仪器的使用过程中最常见的故障就是分离柱入口处堵塞，最主要的原因就是样品处理和缓冲液的配制时有杂质污染了柱子，所以配制完的缓冲液-定要进行过滤才可以使用。为事先预防起见，建议至少每周开始工作前进行-次排气，对于每次故障应做详细纪录。以下是仪器在使用过程中遇到的问题及解决方案。

4.1 最大缓冲液压力管道堵塞，建议按下述顺序松开该单元的入口接头，观察压力是否回零，如回零，则该单元为堵塞源： 光度计 反应器 分离柱 予柱 进样阀，若是光度计因试剂沉淀而堵塞，请检查显色液配制 日期。若大于4周，则另换新液。立即降低反应器温度。用淋洗液 F和清洗液 w 以低流速 (如 0.05mL/min)冲洗 30分钟或更久。若是反应器因试剂沉淀而堵塞，则断开其与光度计的连接，用淋洗液 F和清洗液 w 以低流速(如 0.05 mL/min)冲洗 30分钟或更久，并时刻观察压力变化。若是分离柱或予柱堵塞，分别将堵塞柱反接，用淋洗液 F和清洗液w以低流速(如0.05～0.20 mL/min)冲洗 30分钟或更久，并时刻观察压力变化。待压力正常后再正l88 客 啦 室 戳 学接。若进样阀堵塞，更换从阀到分离柱的连接管。

4.2 最泻冲液压力或最小显色液压力当前所设的最小压力值偏大，所以-旦压力低于此值时便有错误显示，建议降低最小压力限的设定值，直至为0巴压力；瓶口处针型插件的空气滤膜可能污染，或者被缓冲液析出的盐块堵塞滤孔，使瓶内产生负压而供液不足，严重时可以看到液瓶因负压变瘪，建议用注射器从滤器口打入空气，使滤膜通气，必要时更换针型插件；流路产生气泡，松开泵出口接头，排气；泵头进液阀或排液阀中的密封圈污染或损坏，建议将阀于 1：1异丙醇或甲醇中用超声波清洗，必要时更换阀的密封圈。

4.3 峰的分离度差。峰保留时间延迟如果样品的 pH值或浓度不正确，建议采用样品稀释缓冲液制备和稀释样品，控制样品的 pH值为 2.2。

4.4 峰部分重叠淋洗液(A-E)的时间或柱温设置不当，建议对淋洗液(A-E)的作用时间进行针对性地延长〉低柱温以延长保留时间。

4.5 峰带针刺”体系中有气泡，建议排除泵中的气泡。排除光度计中的气泡用手动模式以F和 w冲洗体系。

5 仪器休闲时的维护如果仪器仅在短期内例如两周左右休闲不用，则只需调入休闲程序来进行维护。为此只需注意试剂架上储液瓶中应有足够的溶液供使用即可。

如果仪器在较长时间内例如-个月以上休闲不用，则宜按下述步骤进行维护：(1)取下分离柱和予柱，代之以PEEK连接管。

(2)取下试剂架上的 8瓶试剂，代之以40%异丙醇储液瓶(至少2瓶)。

(3)置入预备程序Start”以40%异丙醇清洗整个流路系统并重复 1～2次。

6 结束语以上是我们在管理和使用 A200型氨基酸分析仪方面的-些经验和体会，除了严格按照仪器使用说明书进行操作外，还需要在实践 中不断积累经验 J。只有精心管理，不断学习新技术、新方法，充分发挥科学仪器在科研、教学及科技开发工作中的作用，最大限度的为教学、科研、生产和社会服务，才能让有限的资源发挥最大的效益。